傷寒桿菌核酸檢測(cè)試劑盒

廣州健侖生物科技有限公司

產(chǎn)品規(guī)格：48T/盒；

 保存條件：避光 -20度 保存。

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1. HeLa細(xì)胞蛋白質(zhì)嘅制備
1）HeLa-kyoto細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM中，并用nocodazole過夜處理嚟抑制生長(zhǎng)。
2）用刮刀收取細(xì)胞，并用PBS洗三次。一個(gè)托盤（25公分×25厘米，100毫升介質(zhì)）可以惹約4毫克嘅蛋白質(zhì)。
3）將細(xì)胞懸液加到兩倍體積嘅裂解緩中，并通過細(xì)支嚟抽吸液體破壞其細(xì)胞膜。4℃，五g低溫離心三個(gè)字，有冇收集蛋白。
2.丙酮沉淀蛋白質(zhì)
1）加5倍體積嘅雪丙酮到蛋白溶液，零下30°C.哺育。
2）4℃，五g低溫離心半個(gè)鐘。
3）棄上清，將蛋白質(zhì)沉淀與80%嘅雪丙酮仔細(xì)撈勻，4℃，五g低溫離心半個(gè)鐘。
4）將蛋白沉淀晾干（逃過*糠），將沉淀溶解于消化緩沖液中（8 M尿素，0.5 M式碳?xì)滗@），較蛋白濃度為5µg/µL。（注：蛋白質(zhì)溶液pH值應(yīng)該為8.0。喺我哋嘅實(shí)驗(yàn)室中，用Bradford法測(cè)定蛋白濃度）。
3.原同烷基化蛋白質(zhì)
1）向蛋白溶液中0.05µg嘅DTT，56℃哺育半個(gè)鐘，持續(xù)振蕩。
2）向其中添加碘乙酰胺，令其終濃度為每µg蛋白中含0.25µg，鼆中室溫哺育半個(gè)鐘。
3）加DTT原液至終濃度為每µg蛋白含0.25µg，閘住反應(yīng)。
4.曳氨酸- C.消化
1）將樣品溶解于6 M尿素（含五十mM式碳?xì)滗@）緩沖液，并添加曳氨酸-C令其終濃度為每五十µg蛋白含1µg。
2）30℃哺育2鐘，將溶液稀釋至0.8 M尿素含五十mM式碳?xì)滗@。
3）每60μg蛋白中加一µg嘅胰蛋白酶，37℃哺育2個(gè)鐘。
4）向樣品中再添加等量嘅胰蛋白酶，37℃哺育過夜，加TFA進(jìn)行酸化，令樣品嘅pH值為2嚟終止消化。