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美國(guó)Novabios拉沙熱病毒抗原檢測(cè)試劑盒（膠體金法）

廣州健侖生物科技有限公司

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 拉沙病毒性出血熱是發(fā)生在西非的一種病程1-4周的急性疾病。雖然*于1950年代描述，但是直到1969年才確定引起該病的病毒。該病毒為一種屬于沙粒病毒科的單鏈核糖核酸（RNA）病毒。已知拉沙熱在幾內(nèi)亞（科納克里）、利比里亞、塞拉利昂和尼日利亞部分地區(qū)流行，但在其它西非國(guó)家也可能存在。

體征癥狀

編輯

80%左右的人類感染為無(wú)癥狀；其余病例為嚴(yán)重的多系統(tǒng)疾病，病毒侵襲身體的若干器官，如肝、脾和腎。拉沙熱的潛伏期為6-21天。該病通常為漸進(jìn)性

發(fā)病，開(kāi)始時(shí)出現(xiàn)發(fā)燒、全身虛弱和不適。幾天后可能出現(xiàn)頭痛、喉嚨痛、肌肉疼痛、胸痛、惡心、嘔吐、腹瀉、咳嗽以及腹痛。嚴(yán)重者可發(fā)展到出現(xiàn)臉部腫脹，胸腔積水，口、鼻、陰道或胃腸道出血，以及低血壓。也可能出現(xiàn)蛋白尿。晚期可見(jiàn)休克、癲癇發(fā)作、震顫、定向障礙和昏迷。 25%的患者出現(xiàn)耳聾、其中半數(shù)在1-3個(gè)月后恢復(fù)某些功能。在恢復(fù)期間可出現(xiàn)短暫脫發(fā)和步履不穩(wěn)。

早期癥狀頗似流感，有寒戰(zhàn)、發(fā)熱、咽痛、惡心、嘔吐、咳嗽、肌痛、吞咽困難、腹瀉和胸腹痛等癥狀，少數(shù)病人有耳聾、眩暈、耳鳴等。體征有相對(duì)緩脈，結(jié)膜充血，顏面、頸、胸充血伴有腫脹，淋巴結(jié)腫大，肺部有羅音，腰部及肝區(qū)壓痛明顯。重癥病人可見(jiàn)滲出性扁桃體炎和口腔潰瘍，有時(shí)有白喉樣偽膜附著。部分病人有斑丘皮疹或出血樣皮疹。嚴(yán)重病人有內(nèi)臟出血、低血容量性休克和急性腎功能衰竭等。有時(shí)有神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，如眼球震顫、譫妄、昏迷、驚厥等。

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三、結(jié)果觀察

觀察孔間沉淀線的數(shù)目及特征。本試驗(yàn)1-5孔( 1:2、1:4、1:8、1:16和1:32的人抗兔IgG)與中央孔(人血清)之間可出現(xiàn)清晰的乳白色沉淀線(圖3)沉淀線。沉淀線與中央孔的距離隨抗原的濃度減小而增大。

免疫瓊脂雙向擴(kuò)散實(shí)驗(yàn)原理、方法、結(jié)果觀察與注意事項(xiàng)

四、注意事項(xiàng)

1、加樣時(shí)不要將瓊脂劃破，以免影響沉淀線的形成。

2、反應(yīng)時(shí)間要適宜，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，沉淀線可解離而導(dǎo)致假陰性、不出現(xiàn)或不清楚。

3、加樣時(shí)不同濃度抗體和抗原不要混淆，影響試驗(yàn)結(jié)果。

4、試驗(yàn)前應(yīng)做預(yù)試驗(yàn)，確定抗體的稀釋度。

產(chǎn)氣莢膜梭菌是臨床上氣性壞疽病原菌中多見(jiàn)的一種梭菌，因能分解肌肉和結(jié)締組織中的糖，產(chǎn)生大量氣體，導(dǎo)致組織嚴(yán)重氣腫，繼而影響血液供應(yīng)，造成組織大面積壞死，加之本菌在體內(nèi)能形成莢膜，故名產(chǎn)氣夾膜梭菌。

一、含鐵牛奶培養(yǎng)基使用原理

含鐵牛奶培養(yǎng)基（Iron Milk medium）主要用于產(chǎn)氣莢膜梭菌的測(cè)定 (GB/T 8538-2008) 。產(chǎn)氣莢膜梭菌具有顯著發(fā)酵乳糖的能力。在牛奶培養(yǎng)液中，迅速分解乳糖產(chǎn)酸，使酪蛋白凝固，并產(chǎn)生大量氣體將凝固的酪蛋白沖散，此種強(qiáng)烈發(fā)酵現(xiàn)象稱“洶涌發(fā)酵”，往往在培養(yǎng)6小時(shí)即可出現(xiàn)，為本菌特點(diǎn)之一。

含鐵牛奶培養(yǎng)基的配制方法與產(chǎn)氣莢膜梭菌洶涌發(fā)酵

二、含鐵牛奶培養(yǎng)基配方(每升)

全脂奶粉：199g

硫酸亞鐵：1g

三、含鐵牛奶培養(yǎng)基使用方法

1、稱取本培養(yǎng)基200g，加入50-60℃溫水溶解，分裝試管，每管10mL，115℃高壓滅菌10min，滅菌后，快速冷卻。本培養(yǎng)基必須新鮮配制。

2、取生長(zhǎng)旺盛的FT培養(yǎng)液1mL接種于含鐵牛奶培養(yǎng)基，46℃水浴培養(yǎng)5h。

3、觀察是否有“暴烈發(fā)酵”現(xiàn)象。

四、含鐵牛奶培養(yǎng)基質(zhì)量控制

下列質(zhì)控菌株接種后于46℃水浴培養(yǎng)5h結(jié)果如下：

菌 名　　　　　　　菌 號(hào)　　 　培養(yǎng)特征

產(chǎn)氣莢膜梭菌　　ATCC13124　　 暴烈發(fā)酵

大腸埃希氏菌　　ATCC25922 　　不發(fā)酵

一、基本原理

硫酸銨沉淀法可用于從大量粗制劑中濃縮和部分純化蛋白質(zhì)。用此方法可以將主要的蛋白從樣品中分離，是免疫球蛋白分離的常用方法。高濃度的鹽離子在蛋白質(zhì)溶液中可與蛋白質(zhì)競(jìng)爭(zhēng)水分子，從而破壞蛋白質(zhì)表面的水化膜，降低其溶解度，使之從溶液中沉淀出來(lái)。各種蛋白質(zhì)的溶解度不同，因而可利用不同濃度的鹽溶液來(lái)沉淀不同的蛋白質(zhì)，這種方法稱之為鹽析。鹽濃度通常用飽和度來(lái)表示。硫酸銨因其溶解度大，溫度系數(shù)小和不易使蛋白質(zhì)變性而應(yīng)用廣。

二、試劑及儀器

硫酸銨(NH4)2SO4、飽和硫酸銨溶液（SAS）、蒸餾水、PBS (含0.2g/L疊氮鈉)、透析袋、超速離心機(jī)、pH計(jì)、磁力攪拌器。

三、操作步驟

以腹水或組織培養(yǎng)上清液為例來(lái)介紹抗體蛋白的硫酸銨沉淀。各種不同的免疫球蛋白鹽析所需硫酸銨的飽和度也不*相同。通常用來(lái)分離抗體的硫酸銨飽和度為33%-50%。

（一）配制飽和硫酸銨溶液（SAS）

1、將767g硫酸銨邊攪拌邊慢慢加到1升蒸餾水中。用氨水或硫酸調(diào)到pH7.0。此即飽和度為100%的硫酸銨溶液（4.1 mol/L，25℃）。

2、其它不同飽和度銨溶液的配制

（二）沉淀

1、樣品（如腹水）20 000g離心30 min（4℃），除去雜質(zhì)沉淀；

2、保留上清液并測(cè)量體積；

3、邊攪拌邊慢慢加入等體積的SAS到上清液中，終濃度為1:1；

4、將溶液放在磁力攪拌器上攪拌6小時(shí)或攪拌過(guò)夜（4℃），使蛋白質(zhì)充分沉淀。